Bouillon Lactosé bilié au vert brillant / cloche (BLBVB)

Usage : Milieu de dénombrement des coliformes totaux (48 h à une température de 37°C. Composition : -Peptone 10,0g -Lactose 10,0g -Bile ddéshydratée 20,0ml -Vert brillant 13,0 mg (pH = 7,4) Préparation : 40 g par litre d’eau distillée. Stérilisation classique. Lecture La cloche de Durham permet le recueil des gaz signant la présence de coliformes, à condition que le milieu ait été agité correctement pour que les bactéries soient bien réparties, y compris sous la cloche. Il est conseillé d’agiter légèrement le milieu plusieurs heures avant la lecture pour favoriser le dégagement de gaz sous la choche de Durham, qui, autrement, peut ne pas être observé pour les dilutions limites. Si plusieurs essais sont effectués, on utilise la table statistique de Mac Grady pour déterminer le nombre de coliformes le plus probable (NPP). On peut déterminer la présence de coliformes thermotolérants ou fécaux en réalisant le test de Mackenzie : repiquage d’une anse de 9 microlitres de chaque tube positif BLBVB à 37 °C dans un nouveau tube BLBVB et un tube d’eau peptonée qui seront incubés à 44 °C). Les tubes positifs à 44 °C permettent de dénombrer les coliformes totaux en utilisant la table de Mac Grady. Si les tubes d’eau peptonée permettent de lire de surcroît la production d’indole, on peut conclure à la présence d’Escherichia coli et réaliser de même son dénombrement.  Eau peptonée exempte d’indole (Tryptone water). Usage : Recherche de l’indole. Composition : -Peptone exempte d’indole 10,0 g -Chlorure de sodium 5,0 g (pH=7,2) Préparation : 15 grammes par litre d’eau distillée. Stérilisation classique. Lecture : L’addition de réactif de Kovacs montre la production d’indole par un anneau rouge.  Eau peptonée tamponnée. Usage : Utilisée pour le pré-enrichissement préalable aux phases d’enrichissement sélectif et d’isolement des salmonelles en permettant notamment de revivifier les microorganismes ayant subi des traitements sublétaux. Composition (g) pouvant être modifiée pour 1 litre de milieu : Peptone : 10,0. Sodium chlorure : 5,0. Phosphate disodique hydraté (9100181) : 9,0. Phosphate monopotassique : 1,5. Phosphate disodique anhydre (9101311) : 3,56. pH du milieu prêt à l’emploi à 25 °C : 7,2 ± 0,2.  0Gélose nutritive. Usage : Milieu d’isolement courant surtout utilisé pour la recherche de FMAR (Flore Mésophyle Aérobie Revivifiable) . Composition : -Extrait de viande 1,0g -Extrait de levure 2,0g -Chlorure de sodium 5,0g -Agar 15.0g (pH =7.4) Préparation : 28 g par litre d’eau distillée. Stérilisation à l’autoclave. Ensemencement : Pour ensemencer il s’agit de faire un dégradé sur toute la gélose afin d’isoler plusieurs colonies. Pour cela, avec une anse de platine, prélever un petite goutte de suspension bactérienne puis faire des stries serrées sur la moitié de la boite de Pétri. Ensuite tourner d’un quart de tour la boite, stériliser à la flamme l’anse et recommencer les stries. Ensuite tourner encore la boite d’un quart de tour et refaire encore les stries (après stérilisation de l’anse). De cette manière toute la boite doit avoir été ensemencée… attention à ne pas brûler la gélose lorsque l’anse est encore très chaude. Examen macroscopique  Taille des colonies  Contour  Relief  Surface  Consistance  Transparence  Pigmentation  Type des colonies  Exigence  Gélose Salmonella-Shigella (Gélose SS). Usage: Isolement des Salmonella et des Shigella mais aussi des Pseudomonas ou des Yersinia enterocolitica. Composition : -Peptone 5.0g -Extrait de viande 5.0g -Lactose 10.0g -Citrate de sodium 10.0g -Citrate de fer ammoniacal 1.0g -Sels biliaires 8.5g -Vert brillant 3.3g -Rouge neutre 25ml -Thiosulfate de sodium 8.5g -Agar 12.0g (pH = 7,3) Préparation : 63 g de poudre dissous par ébullition. Se reporter à la notice en raison de variations de la composition (Formule moins inhibitrice des Shigella à 5,5 g de sels biliaires par exemple). Ne pas autoclaver. Lecture : Lac – : colonies incolores Lac + : colonies rouges Centre noir : H2S + Pas de centre noir : H2S – Ne cultivent normalement sur ce milieu que les Gram – cultivant facilement. Toutefois on peut rencontrer des Enterococcus tout particulièrement pour certaines compositions. Les coliformes, comme les bacilles oxydase + ne sont pas inhibés contrairement aux affirmations parfois rencontrées