Description des Convars M1 et M4 (MALAPA, 2005)

Convar M1. cv. Raraneolo (VU 402) Ce cultivar possède plusieurs variants. Ils sont caractérisés par des feuilles oblongues à lobes foliaires pointus. La couleur du feuillage varie du vert clair au vert sombre, pigmentée ou non en début de germination, au niveau de la jonction entre le limbe et le pétiole et sur le bout des lianes. A maturité, la base de la tige prend un aspect cannelé très caractéristique en étant dépourvue d’aile et en s’ornant le plus souvent d’épines. Le nombre de tige est variable mais le plus souvent on observe une forte ramification à la base. Les ailes sont peu développés et sont raides (peu ondulées). Ce cultivar est florifère, de sexe mâle exclusivement, et rarement bulbifère. La forme des tubercules peut être longue (cylindrique) ou courte (ovale). La couleur de la chair est blanche ou anthocyanée. Les tubercules sont caractérisés par un épiderme rugueux et épais, le plus souvent de couleur noire. De maturité tardive (7-9 mois), ils présentent une bonne tolérance à l’anthracnose. Convar M4. cv. Malingova (VU 047) Ce cultivar est caractérisé par de petites feuilles ovales de couleur verte, homogène et prend une teinte jaunêtre luisante à maturité. La surface du limbe foliaire est lisse, à lobes foliaires pointus. Le pétiole est rarement anthocyané. Les tiges inermes sont carctérisées à maturité par leur aspect cannelé et dépourvu d’ailes. Elles sont également très ramifiées à leur base. Les tubercules sont de formes variables, court (ovale, piriforme, digité ou irrégulière) et présnentent un épiderme interne généralement anthocyané et une chair blanche. La floraison est erratique et les bulbilles sont absentes. Résistant et très tolérant à l’anthracnose, il présente une maturité précoce à tardive (6-9 mois)

Clonage selon les instructions du kit pGEM-T® Easy Vector System (Promega)

Clonage des produits de PCR avec pGEM -T et pGEM- T Easy Vecteurs Utilisation de ligature 2X Rapid Ligation Buffer Haute efficacité de transformation des cellules compétentes JM109 1. Centrifuger brièvement les tubes pGEM- T ou pGEM- T Easy Vector contenant l’ADN de de façon à ce qu’on peut recueillir le contenu au fond du tube. 2. Mettre en place les réactions de ligature. Vortexer vigoureusement le tampon de ligation 2X avant chaque utilisation. Utiliser des tubes de 0,5 ml pour avoir une faible capacité de liaison à l’ADN. 3. Mélanger tout par pipetage et puis Incuber la réaction 1 heure à température ambiante. Incuber les réactions pendant une nuit à 4°C pour la transformation maximale. Réactifs Réaction standard Control positif Control de l’origine Tampon 2X de ligation rapide, T4 Ligase ADN 5µl 5µl 5µl pGEM-T àu PGEM-T Easy Vector (50ng) 1µl 1µl 1µl Produit PCR Xµl – – Solution de Control d’ADN – 2µl – T4 ligase ADN (3 weiss unités/ µl) 1µl 1µl 1µl Rajouter de l’eau distillée pour un volume final de 10µl 10µl 10µl .