Déterminations des caractéristiques physicochimiques des
principes actifs, tutoriel & guide de travaux pratiques en pdf.

Fractionnement de l’extrait et isolement des composés purs

Méthodes de purification de l’extrait (pour qu’il ne reste que des mélanges de principe actifs dans l’extrait) pour faciliter le fractionnement.
Traitement par la chaleur Il consiste à chauffé au bain marie bouillant l’extrait et après refroidissement, le précipité formé est éliminé par centrifugation.
Fractionnement par le n-butanol Il consiste à additionné de n-butanol dans l’extrait aqueux dans une ampoule à décanter. Après agitation, il y a apparition de la phase aqueuse inférieure et de la phase organique supérieure. La phase organique est filtrée sur papier filtre, puis évaporées sous vide après addition de grand volume d’eau distillée.
Précipitation par l’acétate neutre de plomb (ANP) L’ANP est un sel de métal lourd qui a la propriété de précipiter certains composés comme les acides nucléiques, les acides organiques, les polysaccharides et les protéines.
Filtration sur charbon actif Le charbon actif est un adsorbant qui adsorbe de nombreuses substances, en particulier les composés aromatiques à structure cyclique. Ce traitement est utilisé pour décolorer les extraits par déchlorophyllation.L’extrait qui a montré une importante activité sur une souche biologique sera sélectionné par un fractionnement ultérieur. On distingue plusieurs méthodes chromatographiques préparatives. – La chromatographie sur couche mince (CCM) – La chromatographie sur colonne ouverte – La chromatographie flash – La chromatographie liquide à basse pression (LPLC : Low pressure Liquid Chromatography) – La chromatographie liquide à moyenne pression (MPLC : Medium pressure Liquid Chromatography) – La chromatographie liquide : Haute performance (HPLC : High Pressure Liquid Chromatography – La chromatographie de partage centrifuge(CPC). C’est en fonction de la quantité de l’extrait ou de la fraction à purifier, du type de molécules et de leur comportement vis-à-vis des supports et du système de solvant utilisé qu’on fait le choix entre l’une de ces méthodes. Les fractions obtenues lors d’un premier fractionnement sont soumises au test biologique afin de localisé l’activité. Les fractions actives seront à leur tour soumises à des procédés chromatographiques jusqu’à l’obtention des produits purs.

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