Dosage de la Chlorophylle a
La détermination quantitative globale de la fraction particulaire vivante dans les milieux aquatiques est importante pour l’étude et la compréhension des phénomènes écologiques. Pour cela, une estimation de la biomasse phytoplanctonique par voie chimique (par extraction et détermination des pigments photosynthétiques) s’avère satisfaisante, plus simple et plus rapide.
Le dosage de la chlorophylle a est réalisé selon la méthode monochromatique de Lorenzen (1967) utilisant comme solvant l’acétone à 90%.
Principe de la méthode : Mode opératoire : Placer le filtre sur l’équipement de filtration, l’eau doit être filtrée le plus rapidement possible après le prélèvement ; ceci permet l’élimination grossière du zooplancton. Recouvrir le filtre d’une fine couche de la suspension de carbonate de magnésium (environ 1ml). Verser un volume (V1=0.1 l) de l’échantillon à travers le filtre en fibre de verre. Récupérer le filtre, puis le placer dans un tube à centrifuger contenant un volume d’acétone (V2 =15 ml) à 90%. Agiter pendant 1 min, puis déchiqueter le filtre à l’aide d’une baguette en verre à embout coupant. Placer le tube à l’obscurité pendant une vingtaine d’heures au réfrigérateur, de façon à permettre l’extraction de la chlorophylle. Après l’extraction, le tube est centrifugé à 4000 tr / min pendant 5 min. Transférer le surnageant dans la cuve du spectrophotomètre.
Effectuer les mesures d’absorbance aux longueurs d’ondes 750 et 665 nm. Acidifier par addition 10µl d’HCL dans la cuve, agiter puis attendre 6 min. Mesurer les absorbances brutes des extraits acidifiés à 750 et 665nm.
L’Azote ammoniacal
L’azote ammoniacal est sous forme d’ions ammonium (NH4+) dans la gamme de pH des eaux marines. Il occupe une place particulière dans le cycle de l’azote. Ils sont assimilés par les végétaux aquatiques .Par ailleurs, la dégradation de l’azote organique particulaire ou dissous donne lieu à la formation d’azote ammoniacal (qui peut s’oxyder ensuite en nitrite puis nitrate). Ils participent donc à l’activité autotrophe et à l’activité hétérotrophe. Il est utilisé par le phytoplancton comme source d’azote et oxydé par les bactéries nitrifiantes (Aminot et al., 1983).
Principe : Le dosage est basé sur la réaction signalée par Berthelot (1859). En milieu alcalin, l’ammoniac dissous réagit avec l’hypochlorite pour former une monochloramine. Ce composé, en présence de phénol et en milieu oxydant (excès d’hypochlorite), donne lieu à la formation d’un complexe coloré en bleu (le bleu d’indophénol) que l’on peut doser par spectrophotométrie. A 20°C, la réaction demande 6 h pour se développer. L’absorption est mesurée à 630 nm.
La méthode a été appliquée à l’eau de mer, en particulier par Solorzano (1969) et par Koroleff (1969). La précipitation du calcium et du magnésium en milieu basique est évitée par complexation avec le citrate trisodique.
Dosage des Ortho phosphates (PO4-3)
La méthode de Murphy (1962) reste encore aujourd’hui une des plus rapides et des plus simples pour le dosage des ions orthophosphate dans l’eau de régénération. Elle varie de moins de 0,01 µM dans l’eau de surface (pendant la période de croissance du phytoplancton) à 3µM en profondeur.
Principe : Cette technique est basée sur la réaction des ions phosphates avec le molybdate d’ammonium, en présence d’antimoine III ; cette réaction aboutit à la formation d’un complexe que l’on réduit par l’acide ascorbique ; cette réduction mène à la formation d’une solution de coloration bleue dont le maximum d’absorbance a lieu à une longueur d’onde égale à 885 nm.
La méthode utilisée pour le dosage des orthophosphates a été mise au point par Murphy et Riley (1962). Les ions orthophosphates sont susceptibles de réagir avec le molybdate d’ammonium en milieu acide pour former un complexe jaune, le phosphomolybdate d’ammonium. Par réduction de ce complexe, on obtient une coloration bleue. L’utilisation de l’acide ascorbique comme agent réducteur donne les résultats les plus reproductibles et il a l’avantage de pouvoir être utilisé dans un réactif unique : molybdate d’ammonium, acide ascorbique, acide sulfurique et antimonyl tartrate de potassium. L’antimoine fourni par l’antimonyl réduit le temps de développement de la coloration de 24 h à quelques minutes.
Identification des genres récoltés
L’observation des caractères morpho anatomiques du phytoplancton récolté dans la lagune el Mellah nous a permis d’identifier 100 genres représentant trois classes taxinomiques (Cyanophyceae, Bacillariophyceae, Dinophyceae).
La composition floristique se caractérise par la dominance des Diatomées qui représentent 59% de la population phytoplanctonique récoltée ; quant aux Dinoflagellés et les Cyanobactéries, ils représentent respectivement 24% et 17 % de la population phytoplanctonique recensée dans la lagune El Mellah . Nos données montrent que sur les 100 genres recensés, 26 sont reconnus potentiellement toxiques (ce qui représente 27% de la population phytoplanctonique totale ; ces derniers sont répartis comme suit : 12 genres de Dinoflagellés, 13 genres de Cyanobactéries et 3 genres de Diatomées . Nous notons, par ailleurs, que les genres toxiques rattachés aux communautés de Dinoflagellés et de Cyanobactéries représentent les ¾ des genres recensés dans chaque classe ; mais en revanche les Diatomées toxiques ne présentent que 1/20ème du nombre de genres recensés appartenant à cette classe.
Table des matières
1- INTRODUCTION
2 -MATERIEL ET METHODES
2.1 Zone d’étude
2.1.1- La lagune d’El Mellah
2.1.2- Lac Oubeira
2.2. Echantillonnage et prélèvement
2.2.1. Choix et implantation des stations de prélèvement d’échantillons
2.3. Echantillonnage
2.4. Mesure des paramètres physico-chimiques
2.5. Dosage de la Chlorophylle a
2.6.Matière en suspension
2.7. Dosages des sels nutritifs
2.7.1 – Dosage de l’Azote Nitreux (les Nitrite NO2)
2.7.2 L’Azote ammoniacal total
2.7.3 Dosage des Ortho phosphates (PO4-3)
2.7.4- Dosage de l’Azote Nitrique (les Nitrate NO3)
2.8.Analyse statistique des données
2.8.1-Analyses univariées
2.8.2- Analyses bivariées
3- RESULTATS
I – Lagune El Mellah
1- CARACTERISTIQUES PHYSICO-CHIMIQUES DES EAUX
1.1- La Température
1.2-L’ OXYGENE DISSOUS
1.3- Le pH
1.4- La Salinité
1.5- Les Orthophosphates
1.6- LES NITRATES
1.7- Les Nitrites
1.8- L’Azote ammoniacal
1.8- La matière en suspension
1.9- La Chlorophylle a
2- ETUDE QUALITATIVE ET QUANTITATIVE DU PHYTOPLANCTON
2.1 -Identification des genres récoltés
2.2- Densité moyenne globale du phytoplancton récolté dans la lagune El Mellah
II – LAC OUBEIRA
1- CARACTERISTIQUES PHYSICO-CHIMIQUES DES EAUX
1-1- La Température
1.2-L’ OXYGENE DISSOUS
1.3- Le pH
1.4- Les Orthophosphates
1.5- LES NITRATES
1.6- Les Nitrites
1.7 –L’azote ammoniacal
1.8- La matière en suspension
1.9- La Chlorophylle a
2- ETUDE QUALITATIVE ET QUANTITATIVE DU PHYTOPLANCTON
2.1 -Identification des genres récoltés
2.2- Densité moyenne globale du phytoplancton récolté dans le lac Oubeira
3- DISCUSSION
4-CONCLUSION ET PERSPECTIVES
BIBLIOGRAPHIE
ANNEXE 1
ANNEXE 2
ANNEXE 3
ANNEXE 4
