Consommation d’huiles raffinées enrichies en vitamine A par quelques ménages

Evaluation du taux de couverture de la fortification de l’huile enrichie en vitamine A dans la Région de Dakar (Etude I)

Une étude transversale et représentative au niveau national sur la couverture et la consommation des aliments fortifiés au Sénégal a été menée par Global Alliance for Improved Nutrition (GAIN) en collaboration avec le Laboratoire de Nutrition (UCAD). La stratégie d’échantillonnage de cette étude est aléatoire et stratifiée à deux degrés. La base de sondage de l’enquête sur le statut de base en micronutriments menée au Sénégal en 2011 a été utilisée dans cette étude. Ainsi le territoire national a été découpé en quatre zones selon les habitudes de consommation alimentaire :Dakar : qui concerne Dakar et sa banlieue Autres villes : regroupent Diourbel, Kaolack, Louga, Mbour, Saint-Louis,Tambacounda, Thiès et Ziguinchor Zone Rurale 1 : concerne des localités dans les régions de Tambacounda, Ziguinchor et de Kolda, régions de Matam, de Fatick, de Diourbel, de Kaolack, Louga, de Saint-Louis et de Thiès Zone Rurale 2 : couvre les régions de Matam et de Fatick, certaines localités dans les régions de Diourbel, de Kaolack, de Louga, de Saint-Louis et de Thiès Le premier degré d’échantillonnage consiste en la sélection des districts de recensement(grappes) avec une probabilité proportionnelle au nombre de ménages. Quatre vingt (80)grappes ont été sélectionnées sur le territoire national soit 20 dans chaque zone.Le deuxième degré d’échantillonnage consiste en la sélection des échantillons d’huile au sein de chaque grappe sélectionnée. Au total 255 échantillons ont été collectés au niveau national dont 111 dans la région de Dakar (GAIN, 2013).

 Enquête sur la consommation d’huiles enrichies en vitamine A dans quelques ménages de la région de Dakar (Etude II)

 Cadre et type d’étude

Il s’agit d’une étude restreinte, transversale descriptive réalisée dans quelques ménages de la région de Dakar précisément dans les communes d’arrondissement de Dieuppeul Derklé,HLM, Cambérène, Grand Yoff, Parcelles Assainies Ouakam, Gueule Tapée, Médina, GolfSud, Sam Notaire, Keur Massar, Yeumbeul Sud, Yeumbeul Nord, Mbao, Dalifort, Keur Mbaye Fall, Guinaw rail Nord, Pikine Nord, Rufisque Ouest, Rufisque Est.

 Taille de l’échantillon

Un échantillonnage à choix raisonné a été effectué dans les 20 communes d’arrondissement de Dakar sélectionnées dans l’étude FACT présentées précédemment. Danschaque commune, un ménage a été enquêté et 2 prélèvements d’huile ont été effectués selonles critères d’inclusion suivants :Ménages ayant été enquêtés avec succès dans la première étude (FACT)Ménages où vivent au moins une femme de 15 à 49 ans et un enfant de 6 à 59 moisMénages, les plus proches des boutiques vendant de l’huile enrichie qui ont été ciblées dans la première étude.Au total 20 échantillons d’huile froide et 20 chauffés correspondantes ont été prélevés dans les 20 ménages enquêtés, soit 40 échantillons.

Collecte de données

 Questionnaire

Les données concernant cette étude 2 ont été collectées par l’équipe de Nutrition à partir d’un questionnaire (Annexe) comportant plusieurs rubriques relatives à l’identification des ménages précédemment enquêtés dans l’étude FACT, la provenance et la quantité d’huile consommée par le ménage, les recettes et les modes de cuisson de l’huile du ménage.

Collecte des échantillons d’huile

Les échantillons d’huile sont collectés au niveau des ménages juste avant la préparation du déjeuner. Un échantillon d’huile non chauffée et un échantillon d’huile chauffée correspondant sont prélevés. Nous avons demandé à la femme qui prépare le repas de ne pasmodifier ses habitudes. L’échantillon d’huile chauffée est recueilli en début de préparation de repas, avant que l’enquêtée ne mette les ingrédients de sa recette. Une fois l’huile au feu, le temps de chauffage est déterminé et la température mesurée à l’aide d’un thermomètre électronique (Digital MIN-MAX Memory Thermometer Edmonton Ab, Canada) dont la plage de température s’étend de -10°C à +200°C. Les échantillons d’huile sont prélevés à l’aide d’une louche et mis dans des flacons en verre ambré de 30 ml. Ces flacons remplis sont transportés au laboratoire où ils sont gardés au frais à 4°C jusqu’au dosage.

MESURES

La vitamine A (rétinol) contenue dans les huiles est mesurée par une méthode colorimétrique utilisant le dispositif iCheckTM CROMA 3 et par Chromatographie en phase Liquide Haute Performance (HPLC) qui est la méthode de référence.

 Mesure par colorimétrie

La mesure colorimétrique utilisé l’iChec kTM Chroma 3 qui est un dispositif correspondant à un photomètre portable muni d’un écran d’affichage, d’une chambre de mesure et un kit de réactifs ixTEM ELAN (BioAnalyse, Berlin, Allemagne). Le mélange de réactifs contenu dans ce kit réagit spécifiquement avec la vitamine A (Renaud et al., 2013).

Principe

Le principe du dosage est basé sur la réaction colorimétrique de Carr-Price. L’échantillon Contenant la vitamine A réagit avec une solution saturée de trichlorure d’antimoine (SbCl3)dans du chloroforme. Le produit de la réaction est un complexe de couleur bleu détecté à 610nm dont l’intensité est proportionnelle à la quantité de rétinol contenue dans l’échantillon. Les limites de la détection du rétinol par ce dispositif sont comprises entre 3 et 30 mg RE/kg(Renaud et al., 2013).

Mode opératoire

Le dispositif portable est étalonné avec un flacon jetable iExTM du kit ELAN(BioAnalyt, Berlin, Allemagne) contenant 2 ml de réactifs, considéré comme un blanc. Le contrôle est effectué au préalable avec une huile dont la teneur en rétinol est connue. Les Huiles sont analysées à température ambiante sans préparation préalable. Chaque échantillon d’huile enrichie (0,1 ml) est injecté avec une seringue dans le flacon de réaction (kit ELAN).Lorsque le dispositif portable est prêt pour effectuer la mesure, le flacon de réaction est mélangé par 2 retournements successifs et placé immédiatement dans la chambre de mesure du dispositif. La concentration en vitamine A est directement affichée sur l’écran en mg/kg. La concentration en rétinol des huiles chauffées et non chauffées a été simultanément mesurée avec cette méthode.

Mesure par HPLC

La concentration en rétinol des huiles froides a été aussi déterminée par HPLC pour une comparaison de celle-ci avec la concentration en rétinol de ces mêmes huiles mesurées par la méthode colorimétrique.

 Principe

Le principe consiste à extraire le rétinol contenu dans les huiles enrichies par saponification à froid au moyen d’une solution d’hydroxyde de potassium éthanolique(KOH), suivie d’une extraction à l’aide de solvants organiques et d’un dosage par HPLC avec détection photométrique (UV à 325 nm). Les substances sont identifiées sur la base de leur temps de rétention et leur quantité déterminée en utilisant leur surface de pic.

Appareillage

C’est une chaîne de chromatographie en phase liquide haute performance (HPLC)SPECTRA SYSTEM composée d’un dégazeur SCM 1000, d’une pompe P1000XR, d’un échantillonneur automatique AS3000 composé d’un boucle d’injection, d’une colonne de phase inversée Resolve C18 (3,9 x 150 mm) 5µm 90A, d’une pré-colonne et d’un détecteur à barrettes d’iode UV6000LP.

Mode opératoire

La méthode utilisée pour le dosage de la vitamine A dans l’huile par HPLC est celle de la norme Française AFNOR, NF EN 12823-1:2001-01.Pour chaque échantillon 2 g d’huile sont pesés à l’aide d’une balance d’une précision de 0,1mg (OHAUS Corporation, Florham Park, USA) dans un erlenmeyer en verre protégé de lalumière par du papier aluminium. Ensuite 50 ml d’éthanol à 5% d’acide ascorbique et 5 ml de solution KOH 60% (60 g pour 100 ml d’eau) sont ajoutés à l’échantillon d’huile dans l’erlenmeyer. Le mélange est mis sous azote et soumis à une légère agitation magnétique pendant 16 heures à température ambiante. Au bout des 16 heures, la saponification est arrêtée avec 50 ml d’eau pure dans un rapport eau/alcool V/V. La solution saponifiée esttransférée dans une ampoule à décanter additionnée de 50 ml d’hexane. Après agitation, le mélange est laissé quelques minutes pour une décantation de la phase organique contenant l’extrait de rétinol qui est récupéré dans un ballon en verre. Cette opération est répétée 3 fois de suite et les extraits combinés sont rincés 3 fois avec de l’eau ultra pure pour atteindre la neutralité. Les extraits sont ensuite filtrés à travers du sulfate de sodium anhydre pour éliminer les traces d’humidité.Après extraction, le solvant est évaporé à l’aide d’un évaporateur rotatif sous vide(Rotavapor R-210, BÜCHI, Flawil, Switzerland) à une température de 45°C. L’extrait sec est repris dans du méthanol/dichlorométhane (50/50 V/V) et 20 µl sont injectés dans le chromatographe. Chaque échantillon est mesuré en double.Conditions chromatographiques Il s’agit d’une chromatographie en phase inverse avec une colonne Resolve TM C18 (3,9 x150 mm) 5 µm, 90 Å, protégée par une pré-colonne (3,9 x 20 mm) (Waters Corporation,Massachusetts, USA). La phase mobile est constituée d’un mélange Méthanol/Eau à 0,01%d’ammonium acétate dans les proportions 89/11 (V/V) avec un débit de 1 ml/min et l’absorbance est fixée à 325 nm. Tous les solvants utilisés sont de grade HPLC.

La concentration en rétinol esCalcul de la concentrationt déterminée à l’aide de l’équation de droite d’une courbe de calibration externe réalisée à partir d’une solution de rétinol purifiée par HPLC.Contrôle de qualité Le contrôle de qualité est effectué avec un échantillon d’huile dont la concentration en rétinol, VA = 15,8 mg RE/kg [11,1 – 20,5] a été mesurée par un laboratoire de référence(AQUANAL-Aquitaine Analyse, Bordeaux France). Cet échantillon témoin est traité de la même façon que les échantillons d’huile. Au cours du dosage, 2 à 3 points de la solution de rétinol purifiée ayant servi à l’établissement de la courbe de calibration sont mesurés pour vérifier la pente de la courbe de calibration. La nouvelle équation est prise en compte dans le calcul de la concentration en rétinol des échantillons.