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Etude de l’effet d’EB sur la trachée isolée de cochon d’Inde
Cette étude a pour objectif d’étudier l’effet d’EB sur le récepteur histaminique. La trachée isolée de cochon d’Inde a été utilisée car cet organe est riche en récepteur histaminique de type 1. La réponse de l’organe à une stimulation a été enregistrée à l’aide d’un myographe constitué d’une cuve à organe de 20 ml de capacité, reliée à un système d’aération au carbogène (95% d’O2 et 5% de CO2) permettant de maintenir le pH de la solution de survie à 7,4, d’un transducteur isotonique (Ugobasile 7140) et d’un amplificateur- enregistreur de marque Ugobasile. La solution dans la cuve à organe a été maintenue à 37°C.
La solution de survie utilisée est la solution de Krebs-Henseleit légèrement modifiée dont la composition en mM dans l’eau distillée est NaCl 118,1 ; KCl 4,7 ; CaCl2 2,5 ; MgSO4
1,2 ; NaHCO3 25 ; Glucose 11,1 et KH2PO4 1,2. Elle a été préparée extemporanément. L’animal a été tué par dislocation cervicale puis ex-sanguiné au niveau jugulaire. Une incision longitudinale a été réalisée au niveau du cou pour dégager la trachée. Un morceau d’environ 1,5 à 2 cm de long dela trachée a été prélevé et nettoyée en enlevant les tissus adventifs. Il a été mis dans une boîte de pétri contenant de la solution de survie. Puis, l’organe a été découpé en spirale. Ensuite, l’organe a été suspendu sur le transducteur sous une tension initiale de 2 g. L’organe ainsi monté a été laissé s’adapter et s’équilibrer avec les conditions d’expérimentation pendant 1 h en renouvelant la solution de survie toutes les 15 mn. Après l’équilibration, l’organe a été sensibilisé avec 10-5 M d’histamine.
Etude de l’effet d’EB sur la trachée isolée pré-contractée à l’histamine
Après trois lavages espacés de 15 mn et le retour de la tension à son niveau initial, la trachée a été pré -contractée avec 5×10-6 M d’histamine. Au plateau de contraction et sans aucun lavage, différentes concentrations finales dans le baind’EB allant de 25 à 1600 µg/ml avec une progression géométrique de raison 2 ont été testées de façon cumulative. Les pourcentages de relaxation provoquée par chaque concentration ont été calculés en prenant comme 100% l’amplitude du plateau de contraction provoquée par 5×10-6 M d’histamine. La CE50 d’EB a été calculée par régression linéaire en portant les pourcentages de relaxation en
fonction des concentrations.
Etude de l’effet d’EB sur la réponse contractile de la trachée isolée à l’histamine
Après trois lavages espacés de 15 mn et le retour de la tension à son niveau initial, une étude effet-concentration de l’histamine sur la trachée isolée a été réalisée en testant de façon cumulative des concentrations croissantesfinales dans le bain de celle-ci allant de 10-9 à 5×10 -4 M pour avoir l’effet maximal (Emax) correspondant à 100% de broncho-contraction.
Puis, l’organe a été de nouveau lavé 3 fois. Après le retour de la tension à son niveau initial, une solution d’EB a été mise dans le bain pour avoir une concentration finale de 50 ou 100 µg /ml. Après 15 mn d’incubation d’EB et sans aucun lavage, l’étude effet-concentration de l’histamine a été refaite comme précédemment.
La concentration efficace cinquante (CE50) correspondant à la concentration qui provoque une contraction de 50% d’Emax a été calculée dans les deux conditions par régression linéaire en p ortant le pourcentage de contraction en fonction du logarithme décimal de la concentration d’histamine.
ETUDE DE TOXICITE DE L’EXTRAIT BRUT (EB) DE LPA006
Etude de toxicité aiguë
Cette étude a pour objectif de déterminer les doses létales (DL) après une administration unique par la voie orale des doses croissantes d’EB chez la souris.
Des souris femelles non gravides, de la race OF-1, pesant en moyenne 25±2 g ont été utilisés. Elles ont été mises à jeun 12h avant l’expérience. Elles ont été réparties en 5 lots de 5 animaux dont un lot témoin ne recevant que de l’eau distillée et 4 autres lots traités avec EB à 500 mg/kg, à 1000 mg/kg, à 2000 mg/kg et 3000mg/kg du poids corporel respectivement. EB et l’eau distillée ont été administrés par gavage dans un volume de 0,25 ml/animal. Après le traitement, les souris ont eu accès libre à l’eau ainsi qu’à la nourriture.
L’effet de ces doses a été observé pendant les 5 premières heures suivant le traitement et après 12, 24, 48 et 72 h de l’administration du produit. Tous comportements anormaux par rapport à ceux des animaux du lot témoin et la mortalité ont été noté s.
Etude de la toxicité chronique
L’objectif de cette étude était de déterminer l’effet de la prise chronique d’EB sur la
formation des souriceaux(effet tératogène), sur la fonction de reproduction, sur la fonction hépatique, sur la fonction rénale e t sur l’hématologie chez la souris.
a. Etude de l’effet tératogène
Dix couplesdessouris adultes, pesant en moyenne 30±5 g ont été utilisés. Elles ont été divisés en deux lots contenant chacun 5 couples. Les souris femelles ont déjà mis bas une fois . Chaque couple a été mis dans une cage. Les animaux ont un accès à volonté à la nourriture et à l’eau. Après 5 jours, les souris mâles ont été retirées de leur cage. Le premier lot de 5 femelles a servi de témoin c’est-à-direles 5souris femelles n’ont reçu aucun traitement. Les 5 autres femelles du deuxième lot ont été traitées quotidiennement par gavage d’une solution d’EB dans un volume de 0,2 ml/souris pour avoir une dose de 100 mg/kg du poids corporel.
Le traitement a été fait à 10 h du matin avant le renouvell ement de leur nourriture et a duré 17 à 18 jours jusqu’à la mise bas. A la misebas, le nombre de souris par portée,la morphologie des souriceaux et leur comportement ont été observés. Leur poids à la naissance a été déterminé éga lement. La croissance des souriceaux a étésuivie par pesage journalierpendant deux semaines.
Table des matières
Remerciement
Sommaire
Liste des abréviations
Liste des tableaux
Liste des figures
I-INTRODUCTION
II-MATERIELS ET METHODES
A- ETUDES PHYTOCHIMIQUES
1- Préparation de l’extrait brut
2- Partage liquide-liquide d’EB
3- Criblage phytochimique
4- Etude comparative sur CCM d’EB, de FA et de FD
B-TESTS PHARMACOLOGIQUES
1- Animaux d’expérimentation
2- Préparation des extraits pour les expériences
3- Etude de l’activité anti-inflammatoire de la plante
4- Etude de l’activité analgésique
5- Etude de l’effet d’EB sur la trachée isolée de cochon d’Inde
a- Effet d’EB sur la trachée isolée pré-contratée à l’histamine
b- Effet d’EB sur l’activité broncho-contracturante de l’histamine
C – ETUDE DE TOXICITE DE L’EXTRAIT BRUT (EB) DE LPA006
1- Etude de toxicité aigue
2- Etude de la toxicité chronique
a- Etude de l’effet tératogène
b- Etude de l’effet d’EB sur la reproduction
c- Etude de l’effet d’EB sur la fonction hépatique, sur la fonction rénale et sur la formule
sanguine
D- EXPRESSION ET ANALYSE STATISTIQUE DES RESULTATS
III-RESULTATS
A- RESULTATS CHIMIQUES
1- Rendement des extractions
2-Criblage phytochimique
3-Comparaison sur CCM d’EB, de FD et de FA
B-RESULTATS PHARMACOLOGIQUES
1- Activité anti-inflammatoire LPA006
a- Effet anti-oedémateux d’EB
b- Activité anti-oedémateuse d’EB, de FD et de FA
c- Effet-dose de FD
2-Activité analgésique de LPA006
a- Effet analgésique de l’extrait brut
b- Effet-dose d’EB
c- Effet analgésique des différentes fractions de LPA006
3- Etude de l’effet d’EB sur la trachée isolée de cochon d’Inde
a- Effet d’EB sur la trachée isolée pré-contratée à l’histamine
b- Effet d’EB sur l’activité broncho-contracturante de l’histamine
C -RESULTATS TOXICOLOGIQUES
1- Toxicité aigue
2-Toxicité chronique
a- Effet du traitement chronique avec LPA006 sur les souriceaux
b- Effet du traitement chronique au LPA006 sur la fonction de reproduction
c- Fonction hépatique, fonction rénale et hématologie
IV-DISCUSSION
V- CONCLUSION
Bibliographies et webographies
