Recherche des germes pathogènes chez les bivalves

Cette étude qui porte sur la recherche et le dénombrement des Coliformes et des Streptocoques fécaux, a été complétée par la recherche des germes pathogènes chez les bivalves présents dans les 5 sites d’études.

Recherche et dénombrement des germes anaérobies sulfito- réducteurs

Le milieu Viande Foie est un milieu de culture. Il est principalement utilisé en tube profond pour la détermination du type respiratoire des micro-organismes, mais aussi pour la culture de germes anaérobies stricts tels que les Clostridium. *Principe: Conformément à la norme NF T 90-415, après destruction des formes végétatives par un chauffage à 80°C, l’échantillon est incorporé à un milieu de base fondu, additionné de sulfite de sodium et de sel de fer. Après solidification et incubation, la présence de germes sulfito – réducteurs se traduit par un halo noir autour des colonies. *Mode opératoire : Les colonies sont identifiées sur milieu gélosé VF (viande – foie) solide additionné à 1 ml de sulfite de sodium à 10 % et 4 gouttes d’alun de fer 5 %. Un chauffage de la dilution mère est réalisé à 80 °C pendant 10 minutes : il permet de sélectionner les formes sporulées. Plusieurs tubes contenant 15 ml de milieu en surfusion reçoivent respectivement 1ml de suspension. L’incubation dure 24 à 48 heures à 37 °C. Les colonies noires sont identifiées (fig.19). 

Recherche des Salmonelles

Principe: Le sélénite présent dans le milieu d’enrichissement, inhibe la croissance des Coliformes et les Entérocoques et enrichit les Salmonella et Proteus. *Mode opératoire : Conformément à la norme NF V ISO 7218, nous avons procédé comme suit : – Préenrichissement : on met 25g de chair et de liquide inter valvaire broyés légèrement dans 10 fois son volume d’eau peptonnée tamponnée. Incubation à 37 °C pendant 20 h au plus. – Enrichissement : on prélève 1 ml du bouillon de préenrichissement et on ensemence deux tubes de 20 ml chacun de milieux sélectifs liquides (cystine-Sélénite et bouillon tétrathionate). Incubation à 37°C pendant 24 h. – Isolement : on ensemence à partir des bouillons d’enrichissement, la gélose SS (gélose Salmonella – Sighele), qui est un milieu solide utilisé pour l’isolement des salmonelles et des Shigelles. Le développement de la flore secondaire dans le vert brillant, les sels biliaires, les fortes concentrations en thiosulfates et en citrates, le lactose, sucre réactif du milieu, permet de déceler la croissance éventuelle des coliformes (colonies rouges) En outre, les bactéries capables de produire de l’H2S par réduction du thiosulfate donnent en présence des ions de fer des colonies à centre noir. L’ensemencement sur gélose SS se fait par stries dans des boites de Pétri, après 24 heures d’incubation à 37 °C (fig.21). *Lecture : On observe soit : o Des colonies rouges :Enterobacter,Klebsiella et autres coliformes tels E.coli o Des colonies incolores transparentes : Salmonella à H2S -, Shigella,Serratia ,E.Hafniae, Alkalescens, Proteus morganii. o Des colonies incolores à centre noir : Salmonella à H2S +, Proteus vulgaris et mirabilis o Des colonies à centre orangé :Proteus rettgeri, Providencia o Des colonies rouges à centre noir : Citrobacter freundii (en réalité seul le centre noire est visible d’où confusion avec Salmonella), Arizona (même remarque).