TOXICITE AIGUE ET SUBAIGUE DE L’EXTRAIT METHANOLIQUE DES RACINES DE MAYTENUS SENEGALENSIS CHEZ LE RAT

Préparation de l’extrait

Les racines de Maytenus senegalensis ont été découpées en petites morceaux puis rincées avec de l’eau pour nettoyer la saleté et la poussière. Le séchage a été fait à température ambiante et à l’ombre pendant deux semaines. Les racines séchées ont été broyées et réduites en poudre à l’aide d’un broyeur de type Brabender. ❖ Préparation de l’extrait méthanolique des racines de Maytenus senegalensis Une double extraction par macération avec du méthanol a été effectuée. Pour la première extraction, nous avons macéré 100g de poudre de racine dans 500ml de méthanol à température ambiante et à l’ombre pendant 48h ensuite nous avons filtré sur du coton hydrophile, puis sur du papier filtre. Pour la deuxième extraction, nous avons ajouté 250ml de méthanol au macérât puis nous avons filtré 48h après. Enfin nous avons rassemblé les deux filtrats puis nous avons évaporé le solvant à l’aide d’un rotavapor jusqu’à l’obtention d’un extrait pâteux qui a été ensuite séché à l’étuve par simple ventilation pendant deux semaines.

Protocole expérimentale

Etude de toxicité aigue 

La toxicité orale aigue des extraits méthanoliques de la poudre de racines de Maytenus senegalensis a été évaluée chez le rat par la détermination de la DL50 conformément à la ligne directrice 425 de l’OCDE pour les essais de produits chimiques adopté le 3 octobre 2008 (OCDE, 2008). 13 ❖ Principe de l’essai Dans cet essai, nous avons appliqué une progression de doses uniques sur les animaux, un par un, à des intervalles d’au moins 48 heures. Les intervalles entre l’administration des doses sont dictés par le moment d’apparition, la durée et la gravité des effets toxiques. Le premier animal reçoit une dose déterminée par un essai principal ou basée sur les données de la littérature, si l’animal survit, le deuxième animal va recevoir une dose supérieure à la première et s’il meurt ou paraît moribond une dose inférieure. Un test principal a été effectué avec la dose de 2000mg/kg chez trois rats femelles. Ensuite sur un lot de trois rats femelles, le premier animal a reçu une dose de 500mg/kg, après 48h sans effet, le second animal a reçu une dose de 1000mg/kg, puis le troisième a reçu 5000mg/kg. Pour ce test des rats femelles de poids 254±20 g ont été utilisés. ➢ Administration Après avoir soumis les rats à jeun pendant 12 heures, ils ont été pèses et identifiés individuellement par des marques sur la queue. La substance d’essai a été administrée oralement par gavage. Apres l’administration de la substance, les animaux étaient à nouveau privés de nourriture pendant 3 à 4 heures. ➢ Observation Apres traitement, les animaux étaient observés individuellement durant les 30 premières minutes et régulièrement pendant les 24 heures. L’observation a duré 14 jours et se faisait deux fois par jours au vu de déterminer d’éventuels décès. Elle portait également sur les signes cliniques, changement affectant la peau, la fourrure, la démarche, la respiration, des comportements stéréotypés (toilettage excessif, parcours circulaires répétitifs) et des comportements bizarres tels que automutilation, marche à reculons etc. ➢ Poids corporels Les animaux ont été pesés au premier jour juste avant l’administration de la substance puis chaque semaine jusqu’à la fin du test. Les variations de poids ont été calculées et enregistrées. 

Etude de toxicité subaiguë 

La toxicité subaiguë des extraits méthanoliques de la poudre de racines de Maytenus senegalensis a été évaluée chez le rat conformément à la ligne directrice 407 de l’OCDE pour les essais de produits chimiques adopté le 3 octobre 2008 (OCDE, 2008). 14 Pour ce test, 24 rats (12 males et 12 femelles) ont été utilisés pour les différentes doses à tester (500,1000 et 2000mg/kg) et le groupe témoin. A la veille du test, les animaux ont été pèses, identifiés individuellement par des marques sur la queue puis répartis au hasard en quatre lots de six animaux (3males et 3 femelles) le quatrième lot étant constitué du lot témoin qui va recevoir juste de l’eau minérale additionnée de 10% de méthanol. ➢ Administration Après avoir soumis les rats à jeun pendant 12 heures, l’administration de la substance a été faite quotidiennement par gavage à l’aide d’une sonde pendant 28 jours. Les séances de gavage étaient faites au même moment de la journée vers 8h30 du matin. Observation La période d’observation a durée 28 jours. L’observation était faite deux fois par jours et des examens cliniques ont été faits aux mêmes heures de la journée une fois par jour pour relever les changements affectant la peau, la fourrure, la démarche, la respiration, des comportements stéréotypés et des comportements bizarres. Chaque semaine, les urines de 24heures ont été recueillies à l’aide des cases métaboliques pour les tests biochimiques urinaire (protéines, glucoses, pH) qui ont été réalisés sur place à l’aide de bandelettes réactives multiparamétriques. ➢ Poids corporels Les animaux ont été pesés au premier jour juste avant l’administration de la substance puis chaque semaine jusqu’au jour du sacrifice. Les variations de poids ont été calculées et enregistrées. Le tableau 1 récapitule le protocole d’étude de la toxicité subaiguë et l’évolution du nombre de rat durant les 28 jours.