Description des travaux d’étude de l’activité antimicrobienne des HE d’Eucalyptus

L’évolution rapide des bactéries pathogènes vers la multirésistance aux antibiotiques est une des motivations essentielles à la recherche de nouvelles molécules antimicrobiennes. De nombreux travaux antérieurs étaient focalisés sur la mise en évidence de pouvoir anti – microbien de plantes médicinales. Ceux dont l’efficacité contre les micro-organismes pathogènes ont été prouvés, trouvent des applications pratiques dans divers domaines. Les HE constituent les extraits les plus largement exploités. L’Algérie de part sa situation géographique et son climat exceptionnel, abrite un grand nombre de plantes médicinales et aromatiques dont la plupart est exploité dans des conditions artisanales et marginales par rapport aux modalités modernes de production et de valorisation. Ainsi, avec le regain d’intérêt que connaissent les plantes à l’échelle internationale, plusieurs voix commencent à se faire entendre en faveur d’études en profondeur de nos plantes locales dans le but de rechercher des substances naturelles actives pour une éventuelle lutte biologique contre les infections microbiennes. A cet effet, nous nous sommes engagés à étudier l’effet antimicrobien des HE d’Eucalyptus globulus et Smyrnium olusatrum, afin de vérifier si leur pouvoir antiseptique est aussi important que celui des espèces étudiées ailleurs et également si la variabilité de la composition chimique influence l’activité antimicrobienne de ces essences. Pour ce faire, nous avons subdivisé.

L’étude de l’activité antimicrobienne des deux huiles a été réalisée au niveau du laboratoire de Microbiologie du département de Biochimie- Université Badji-Mokhtar, Annaba, sur les souches bactériennes suivantes : Bacillus rhurinziencis, Bacillus subtilis, Citrobacter, frendii, Enterobacter aerogenes, Escherichia coli, Proteus mirabilis, Providencia alcalifaciens, Pseudomonas aeruginosa et Staphylococcus aureus.Les souches fongiques:Aspergillus niger, Candida albicans et Penicillium chrysogenum.

Matériel microbiologique

Nous avons choisi de travailler sur une gamme de microorganismes afin de donner une idée sur l’étendu du champ d’activité antimicrobienne de nos produits. Les souches bactériennes et le germe fongique Candida albicans employés proviennent de l’institut Pasteur et de prélèvement de malades du C.H.U.- Annaba. Les souches fongiques Aspergillus niger et Penicillium chrysogenum ont été prélevées du lac Oubaira-Elkala, Eltarf. Les souches microbiennes ont été identifiées au département de Biochimie, université Badji- Mokhtar, Annaba. les milieux de culture Le milieu de Mueller- Hinton et Sabouraud solides ont été utilisés dans la détermination des concentrations minimales inhibitrices CMI et Les concentrations minimales destructives (bactéricides et fongicides) CMD des souches microbiennes vis-à-vis des témoins et des HE.

Préparation des suspensions de micro-organismes

Les suspensions de micro-organismes sont préparées à partir des bouillons d’enrichissement des différentes souches incubées pendant 24 heures, à 37°C pour les bactéries, et à 30°C pour les levures. A 9 ml d’eau physiologique stérile, on ajoute 100 μl du bouillon. Pour les champignons, les suspensions sont préparées à partir d’une culture de10 jours ayant atteint le stade de sporulation sur milieu Sabouroud. Elle est préparée dans de l’eau physiologique contenant du Tween 80 et ajustée à 105 UFC (unité formant colonie)/ml par comptage sur une cellule de Mallassez.L’Antibiogramme est un examen de laboratoire permettant d’apprécier la sensibilité d’une bactérie prélevée chez un malade vis-à-vis de divers antibiotiques  La technique utilisée dans notre travail est la technique NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standart) . Cette méthode diffère selon que la bactérie soit exigeante ou non. Dans notre étude les souches bactériennes utilisées sont des bactéries non exigeantes. Les conditions techniques suivantes doivent être respectées : Milieu Pour les bactéries, le milieu standard utilisé est le Mueller-Hinton, c’est un milieu standardisé selon les normes de l’OMS, c’est-à-dire d’une manière telle qu’il permet la croissance de nombreuses bactéries. Pour les germes fongiques le milieu standard utilisé est le Sabouroud. L’épaisseur de la gélose doit être strictement de 4 mm répartie uniformément. Les boites sont pré-séchées avant l’emploi . Préparation des disques Nous avons utilisé le papier Wattman N°3 coupé en disques de 6 mm de diamètre. Ces derniers doivent avoir un contour régulier pour donner une zone d’inhibition facile à mesurer. Les disques, une fois préparés, sont placés dans un tube à essai contenant 10 ml d’eau distillée et autoclavés 20 mn à 120° C.

L’action du produit se manifeste par la formation d’une auréole d’inhibition autour du disque. Pour chaque disque, on mesure avec précision le diamètre de la zone d’inhibition à l’aide d’un pied à coulisse ou d’une règle. Un produit est considéré actif, s’il donne un diamètre d’inhibition ≥ 15mm. Une fois l’antibiogramme est réalisé et les diamètres d’inhibition sont mesurés, on passe à la deuxième étape de l’étude de l’activité antimicrobienne ; il s’agit de la détermination de CMI.