Mémoire Online: Roles de la galectine 3 dans l’immunité innée par les neutrophiles

Sommaire: Roles de la galectine 3 dans l’immunité innée par les neutrophiles

Liste des tableaux
Liste des figures
Liste des abréviations
Chapitre 1: Introduction Générale
1.1. La réponse immunitaire
1.1.1. Inflammation
1.1.1.1. Médiateurs de l’inflammation
1.1.2. Immunité Innée
1.1.3. Immunité acquise
1.1.3.1. Théorie du soi et du non soi
1.1.3.1.1. PAMPs et PRR
1.1.3.2. Théorie du danger
1.1.3.2.1. DAMPs et Alarmines
1.2. Neutrophiles
1.2.1. Rôles dans l’immunité innée
1.2.1.1. Chimiotaxie et migration
1.2.1.2. Dégranulation
1.2.1.3. Phagocytose
1.2.1.4. ROS
1.2.1.5. NETs
1.2.2. Migration
1.2.2.1. Paradigmes
1.2.2.1.1. Chimiotaxie et activation
1.2.2.1.2. Roulement et adhésion
1.2.2.1.3. Migration transendothéliale
1.2.2.1.4. Migration transintersticielle et transépithéliale
1.3. Pneumonie à pneumocoques
1.3.1. Morbidité
1.3.2. Recrutement leucocytaire
1.3.3. Molécules d’adhésion
1.4. Glycobiologie
1.4.1. Oligosaccharides O-liés
1.4.2. Oligosaccharides N-liés
1.4.3. Les lectines
1.5. Galectines
1.5.1. Description
1.5.2. Expression
1.5.3. Rôles
1.5.4. Modes d’actions
1.6. Galectine-3
1.6.1. Description
1.6.2. Expression
1.6.3. Rôles
1.6.4. Souris galectine-3 KO
1.6.5. Modes d’action
1.7. Problématique
1.7.1. Contexte
1.7.2. Hypothèse générale
1.7.3. Objectifs spécifiques
1.7.3.1. Rôle de la galectine-3 sur le neutrophile
1.7.3.2. Modes d’actions de la galectine-3
1.7.3.3. Rôle de la galectine-3 dans la migration p2-intégrines indépendante des neutrophiles
Chapitre 2: La galectine-3 interagit avec les neutrophiles naïfs et stimulés pour induire des réponses immunitaires innées
2.1 Résumé
2.2 Abstract
2.3 Introduction
2.4 Materials and methods
2.4.1 Reagents, antibodies, and galectin-3
2.4.2 Neutrophil purification
2.4.3 L-selectin shedding on neutrophil
2.4.4 Production of IL-8 by neutrophils
2.4.5 Cleavage of galectin-3 by neutrophils
2.4.6 Inhibition of galectin-3 by proteases inhibitors
2.4.7 Confocal microscopy
2.5 Results
2.5.1 Galectin-3 induces L-selectin shedding on neutrophils
2.5.2 Galectin-3 induces IL-8 synthesis by neutrophils
2.5.3 Galectin-3 is cleaved by primed human neutrophils
2.5.4 Lactose, a galectin-3 antagonist, inhibits galectin-3 cleavage by primed neutrophils
2.5.5 Galectin-3 is cleaved by neutrophil elastase
2.5.6 Galectin-3 is cleaved by neutrophils primed with fMLP or IL-8
2.5.7 Galectin-3 distributions in neutrophils differ depending on neutrophil states
2.6 Discussion
2.7 Acknowledgment
2.8 Figure Legends
2.9 Figures 1
Chapitre 3: Visualisation de l’oligomérisation de la galectine-3 à la surface des neutrophiles et des cellules endothéliales grâce à la technique de « fluorescence résonance energy transfer »
3.1. Résumé
3.2. Abstract
3.3. Introduction
3.4. Materials and Methods
3.4.1. Reagents
3.4.2. Expression and purification of human galectin-3
3.4.3. Non-specific labeling of human galectin-3
3.4.4. C-terminus spécifie fluorescence labeling of human galectin-3 tagged with short transglutaminase (TGase) peptide séquence (TG1)
3.4.5. Fluorescence intensity and galectin-3 purity
3.4.6. Microplate Fluorescence résonance energy transfer (FRET) measurement
3.4.7. Neutrophils and galectin-3
3.4.8. Neutrophil Adhésion
3.4.9. Confocal microscopy
3.4.10. Fluorescence Recovery after photobleaching (FRAP)
3.5. Results
3.5.1. Détection of FRET signal from galectin3-TGl-Alexa bound to asialofetuin
3.5.2. Détection of FRET signal from galectin3-TGl-Alexa interacting with neutrophils
3.5.3. Détection of FRET signal at the adherentjunction between neutrophils and endothelial cells
3.5.4. Stability of the galectin-3 lattice
3.6. Discussion
3.7. Acknowledment
3.8. Figure legends
3.9. Figures
Chapitre 4: Rôle de la galectine-3 dans le recrutement des leucocytes dans un modèle murin d’infection pulmonaire à Streptococcus pneumoniae
4.1. Résumé
4.2. Abstract
4.3. Introduction
4.4. Material and methods
4.4.1. Chemoattractant assay
4.4.2. Expression and purification of human galectin-3
4.4.3. Mouse streptococcal pneumonia model
4.4.4. Inflammatory cells and cytokines
4.4.5. LungCFU
4.4.6. Statistical analysis
4.5. Results
4.5.1. Decreased leukocyte recruitment in the alveoli of galectin-3 déficient mice after infection with S. pneumoniae
4.5.2. Decreased neutrophil recruitment in the alveoli of galectin-3 déficient mice after
infection with S. pneumoniae
4.5.3. MPO levels in the lungs of galectin-3 déficient mice
4.5.4. TNF-a, MIP-2 and KC in the BAL fluids of galectin-3 déficient mice
4.5.5. Bacterial load in the lungs of galectin-3 déficient mice
4.5.6. Administration of galectin-3 increases leukocyte/neutrophil recruitment in the alveoli of galectin-3 null mice infected with S. pneumoniae
4.5.7. Immune response of galectin-3 déficient mice against E. coli infection
4.6. Discussion
4.7. Figure legends
4.8. Figures
Discussion
5.1. La galectine-3 dans Factivation des neutrophiles
5.2. Inactivation de la galectine-3
5.3. Modes d’actions de la galectine-3
5.4. Activités de la galectine-3
5.5. Modèle in vivo de migration du neutrophile
5.6. Modèle in vitro de migration du neutrophile
Bibliographie
Appendice 1 – Résultats non publiés
Appendice 2 Galectin-3 interacts with naïve and primed neutrophils, inducing innate immune responses
Appendice 3 Visualization of galectin-3 oligomerization on the surface of neutrophils and endothelial cells using fluorescence résonance energy transfer
Appendice 4 – Rôle of galectin-3 in leukocyte recruitment in a murine model of lung infection by Streptococcus pneumoniae
Appendice 5 – Seeing strangers or announcing « danger »: galectin-3 in two models of innate immunity

Extrait du mémoire roles de la galectine 3 dans l’immunité innée par les neutrophiles

Chapitre 1: Introduction Générale
1.1.La réponse immunitaire
Le corps humain fait face à de multiples attaques et ce, sur une base quotidienne. Bien que ces insultes soient de natures très variées (microbiennes, tumorales, physiques, chimiques, etc.), les attaques microbiennes (virus, bactéries champignons, parasites) sont souvent les plus redoutées. Afin de conserver son intégrité, le corps humain a su développer des mécanismes pour se parer contre les attaques de microorganismes, et ces mécanismes composent la réponse immunitaire. La réponse immunitaire, engendrée par l’inflammation, comprend la réponse immunitaire innée et la réponse immunitaires acquise. Ces processus sont intimement reliés et sont essentiels pour la défense contre toutes attaques menaçant l’intégrité de l’hôte. Ils doivent donc êtres régulés de très près, puisqu’une activation trop importante de l’immunité peut s’en prendre aux tissus sains de l’hôte et compromettre la résolution de l’infection.

1.1.1. Inflammation
La réponse inflammatoire est habituellement le résultat d’une attaque ayant compromis ou endommagé les barrières naturelles du corps, tel que la peau ou les muqueuses, favorisant ainsi la colonisation par des microorganismes envahisseurs.

Les premières observations des manifestations physiques du corps en réponse à l’infection, au challenge par un antigène, ou à n’importe quel dommage physique ou chimique remontent à l’époque romaine. Ces manifestations ont été regroupées sous un processus appelé inflammation et ont permis d’établir cinq symptômes de base; la rougeur (rubor), le gonflement (tumour), la chaleur (calor), la douleur (dolor) et l’altération des fonctions (functio laesia). A l’époque romaine, l’inflammation a donc été reconnue comme étant le système de défense de l’hôte contre les attaques extérieures.

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Roles de la galectine 3

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