Mesure de l’intensité de la résistance des populations d’Anopheles gambiae s.l

Selon l’OMS 2018 ,il a été ainsi suggéré d’évaluer de manière plus approfondie l’importance opérationnelle, potentielle de tout phénotype de résistance détecté à l’aide des concentrations discriminantes en exposant d’autres échantillons de moustiques provenant de la même population vectorielle à de fortes concentrations des insecticides(5 et 10 fois la concentration discriminante) concernés. Bien que ces fortes concentrations d’insecticide ne correspondent pas aux doses d’application recommandées sur le terrain, elles fourniront des informations pertinentes sur l’intensité de la résistance ou sur la « force » de l’expression du ou des phénotypes de résistance en question. Le test de sensibilité de l’OMS pour les moustiques adultes a ainsi été élargi pour couvrir aussi l’utilisation de concentrations représentant 5 et 10 fois les concentrations discriminantes, de manière progressive. Ces tests ont été effectués selon les mêmes procédures que les tests de sensibilité.

Validité et interprétation des résultats des tests de sensibilité et d’intensité de la résistance

D’après (OMS, 2013) nous pouvons considérer un moustique comme étant mort, s’il est immobile, incapable de se tenir sur ses pattes ou de voler de manière ordonnée après les 24 heures d’observation post-test. La mortalité 24 heures post-exposition est déterminée par la formule suivante. 17 𝑴𝒐𝒓𝒕𝒂𝒍𝒊𝒕𝒆 𝒐𝒃𝒔𝒆𝒓𝒗é𝒆 = 𝑁𝑜𝑚𝑏𝑟𝑒 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑚𝑜𝑢𝑠𝑡𝑖𝑞𝑢𝑒𝑠 𝑚𝑜𝑟𝑡𝑠 𝑁𝑜𝑚𝑏𝑟𝑒 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑚𝑜𝑢𝑠𝑡𝑖𝑞𝑢𝑒𝑠 𝑡𝑒𝑠𝑡é𝑠 × 100 Lorsque la mortalité des témoins est supérieure à 20%, le test est invalidé. Si elle est inférieure à 5%, le test est valide sans aucune correction nécessaire. Lorsque la mortalité des témoins est comprise entre 5% et 20%, la mortalité des populations testées doit être corrigée par la formule d’Abbott ci-dessous. 

Test synergiste avec le PBO

Des populations d’Anopheles gambiae s.l. résistantes aux insecticides (pyréthrinoïdes) ont été soumises à un test biologique synergiste/insecticide [PBO (butoxyde pipéronyle)] pour mesurer l’implication ou non des mono-oxygénases dans la résistance de ces populations.

Procédure du test

Pour réaliser ce test nous avons utilisé quatre tubes d’observation préparés de la même manière que pour les tests de sensibilité. Un effectif de 20 à 25 moustiques est distribué par tube, puis les moustiques mis en observation pendant une heure. Les tubes d’exposition à pastille rouge sont préparés en utilisant cinq tubes d’exposition (quatre marqués à pastille rouge et un porteur d’une pastille jaune). Les deux premiers tubes d’exposition sont tapissés d’une feuille de papier imprégné d’insecticide (à la concentration discriminante), deux autres tubes à pastille rouge avec une feuille de papier imprégnée de PBO à 4%. Le tube d’exposition à pastille jaune aussi tapissé avec papier d’imprégné huile (contrôle). A la fin du temps d’observation, les moustiques des deux tubes d’observation sont transférés dans les deux tubes avec le PBO pour une exposition d’une heure. Après cette exposition au PBO, les moustiques d’un des tubes sont remis dans le tube d’observation correspondant et l’autre soumis à nouveau à l’insecticide. Simultanément, le reste de l’échantillon est transféré dans les tubes d’exposition à insecticide. Les moustiques témoins sont transférés dans le tube à pastille jaune. Après exposition, les moustiques sont transférés de nouveau dans leur tube d’observation respectif. Les Knock down sont enregistrés sur les fiches test comme pour les tests de sensibilité. Les moustiques sont gardés et nourris avec du coton imbibé de jus sucré pendant 24 heures aux conditions de température et d’humidité requises par le test standard de l’OMS. A l’issue de ces 24 heures, la mortalité différée est enregistrée dans les fiches tests. Cette expérience est répétée trois fois pour avoir l’effectif à tester. II.4.8. Critères de validation des résultats Le test PBO est annulé si la mortalité des lots témoins est supérieure à 20% et celle des lots PBO seul supérieur à 10%. Les tests biologiques sur un couple synergiste /insecticide sont valides si la mortalité des lots PBO seul est inférieure à 10% et la mortalité des lots témoins inférieure à 5% avec une nécessité de faire une correction si la mortalité des témoins est comprise entre 5 et 20% par la formule d’Abbott.