Rappel sur les virus influenza

Le virus de la grippe est un virus à ARN enveloppé à capside symétrique complexe appartenant à la famille des Orthomyxoviridae ; cette famille comprend un genre, Influenza virus, et 3 types, A, B, C. La grippe est une infection respiratoire aigue évoluant sous forme d’épidémies, parfois mondiales. Le premier isolement de virus grippal humain a été effectué en 1933.

Les femmes enceintes et les nourrissons ont un risque accru de développer une maladie grave, complexe et parfois mortelle de la grippe. Que la grossesse est un facteur de risque pour les maladies graves et mortelles de grippe a été bien établie au cours des pandémies de 1918 « grippe porcine » et 1957 « grippe asiatique ». Le risque accru pour les femmes enceintes de développer la grippe sévère au cours des épidémies saisonnières a également été documenté. En conséquence, la vaccination contre l’influenza est recommandée aux femmes enceintes. De même le risque élevé associé à la grippe qui survient en dehors des pandémies pour les nourrissons est maintenant bien établi. La quasi-totalité de ces données épidémiologiques démontrant un risque accru pour les femmes enceintes et les jeunes nourrissons de développer une maladie compliquée et mortelle de grippe découle d’étude dans les pays industrialisés, dans les zones tempérés et sub tropicales. En revanche, il y a un manque de données épidémiologiques dans les pays tropicaux en développement qui apporte un éclairage sur l’incidence de la grippe confirmée en laboratoire. En grande partie, cela est due au fait qu’il y a seulement un nombre limité de laboratoire dans les pays en développement qui ont l’expertise et l’équipement nécessaire pour mener des tests sur le virus de la grippe. Compte tenu de la récente propagation parmi les humains d’un nouveau virus « porcin » de l’influenza (H1N1) dans l’hémisphère nord il est attendu que cette souche pourrait se répandre dans les régions tempérées de l’hémisphère sud et les tropiques, notamment en Afrique sub-saharien. Si cela se produit, il est possible que le virus puisse dérivé antigéniquement, ou augmenté sa capacité à provoquer des maladies grâves au cours des mois à venir. Par conséquent, le suivi du virus de la grippe porcine et la caractérisation des isolats est indispensable avant le retour du temps frais automne et en hiver dans l’hémisphère nord. Un suivi semblable des virus au cours de la prochaine saison froide dans l’hémisphère nord fournira de la même façon de précieux renseignement aux autorités de santé publique dans l’hémisphère sud. Pour détecter la présence du virus H1N1 de la grippe porcine de 2009 et autres virus grippaux au Mali, le Centre pour le Développement des Vaccins, Mali (CVD-Mali), un département au sein du ministère de la santé du Mali, se propose d’effectuer une surveillance de routine de la grippe en liaison avec les centres de contrôle de la maladie des établissements de soin de santé sentinelle à Bamako, capitale du Mali. Comme les femmes enceintes, les nourrissons les enfants ont un risque accru pour la morbidité et la mortalité de la grippe, la surveillance proposée sera menée dans ces populations.

Rappel sur les virus influenza 

Le virus de la grippe appartient à la famille des orthomyxoviridae, c’est un virus enveloppé à capside symétrique complexe et responsable des infections à influenza dans les maladies respiratoires aigues et qui sont très contagieuses. Les virus de type A sont plus virulents que les virus de type B et C (ce dernier n’est retrouvé que chez l’Homme, chez qui il ne provoque que des cas isolés).

Classification du virus de la grippe

Les virus de la grippe appartiennent à trois genres différents : les genres Influenzavirus A, B, C de la famille des Orthomyxoviridae.

Selon la nature des protéines du virus, celle-ci sera classée dans le type A, le type B, ou le type C. Les virus de type A (eux seuls) sont subdivisés en plusieurs sous-types. Ces sous-types dépendent de la nature des protéines de l’Hémagglutinine (HA) et de la Neuraminidase (NA), qui sont situées sur l’enveloppe du virus. A ce jour, 15 protéines HA différentes (H1 à H15) et 9 protéines NA différentes (N1 à N9) ont été identifiées. L’association d’une protéine HA donnée avec une protéine NA donnée forme un sous-type particulier. Exemple : H1N1 ou H3N2.

Pour un même type ou sous-type de virus, il existe différentes souches, c’est-àdire différents variants.

Morphologie, composition chimique 

Il s’agit de particules rondes de 80 à 120 nm de diamètre ; parfois ces particules sont filamenteuses (virus grippal de type A). On distingue :

L’enveloppe :
C’est une enveloppe glucido-lipido-protidique provenant de la membrane cytoplasmique de la cellule d’où est sorti le virus.

Le matériel génétique :
C’est un ARN monocaténaire segmenté, 8 segments pour les types A et B, et 7 segments pour le type C. Chaque segment d’ARN correspond à un gène, qui code pour une ou deux protéines données. Les gènes du virus sont indépendants physiquement les uns des autres, puisqu’ils sont situés sur des segments différents. C’est un point très important pour la variabilité des virus grippaux. L’ARN des virus de la grippe est dit de « polarité négative » c’est-à-dire que le brin d’ARN présent dans la particule virale correspond à un « négatif », et qu’il faudra construire le brin complémentaire, le « positif », pour lire l’information génétique.

Les protéines :
Deux protéines sont particulièrement importantes chez le virus de la grippe : l’Hémagglutinine (HA) et la Neuraminidase (NA). Elles sont enchâssées dans l’enveloppe de la particule virale.

L’Hémagglutinine (HA) :
C’est un trimère de deux glycoprotéines, il s’agit d’une protéine de l’enveloppe du virus : une partie est située vers l’extérieur de la particule virale, une partie âssée dans l’enveloppe, et une partie situé vers l’intérieur. L’Hémagglutinine est formée de deux sous-unités :
> La sous-unité HA1 qui a pour rôle d’attacher la particule virale à la cellule cible, et lui permettre d’entrer à l’intérieur.
> La sous-unité HA2 joue un rôle dans les étapes ultérieures permettant la libération du contenu du virus dans la cellule.

La Neuraminidase (NA) :
C’est un tétramère d’une seule protéine glycosylée. Tout comme l’Hémagglutinine, la Neuraminidase est également enchâssée dans l’enveloppe de la particule virale. Son rôle est de rompre la liaison entre les molécules d’Hémagglutinine et les molécules d’acide sialique.

Table des matières

Introduction
Objectifs
1. Généralités
1.1. Rappel sur les virus influenza
1.2. Classification du virus de la grippe
1.3. Morphologie, composition chimique
1.3.1. L’enveloppe
1.3.2. Le matériel génétique : ARN
1.3.3. Les protéines
1.3.3.1. L’Hémagglutinine (HA)
1.3.3.2. La Neuraminidase (NA)
1.4. Pouvoir pathogène
1.4.1. Pouvoir pathogène spontané
1.4.1.1 chez l’homme
1.4.1.2 chez les animaux
1.4.1.2.1. Les oiseaux
1.4.1.2.2. Le porc
1.4.1.2.3. Autres mammifères
1.4.2. Pouvoir pathogène expérimental
1.5. Multiplication du virus
1.5.1 Attachement du virus à la cellule cible
1.5.2. Entrée du virus dans la cellule, par endocytose
1.5.3. Diminution du pH de vésicule d’endocytose
1.5.4. Fusion, libération du contenu du virus dans la cellule
1.5.5. Entrée de l’ARN viral dans le noyau de la cellule
1.5.6. Fabrication de nouveaux brins d’ARN
1.5.7. Production de protéines du virus
1.5.8. Sortie de nouveaux exemplaires d’ARN viral du noyau
1.5.9. Migration des constituants du virus vers la membrane de la cellule
1.5.10. Assemblage des constituants du virus
1.5.11. Production de nouvelles particules virales par bourgeonnement
1.5.12. Libération des particules virales
1.6. Diagnostic virologique
1.6.1. Diagnostique direct
1.6.1.1. Prélèvement
1.6.1.2. Diagnostic
1.6.1. 3. Isolement
1.6.2. Diagnostic indirect
1.6.2.1. Déviation du complément
1.6.2.2. Inhibition de l’hémagglutination
1.7. Virus influenza A
1.7.1. Historique
1.7.2. Epidémiologie du virus influenza A
1.7.3. Transmission du virus influenza A
1.8. Prévention et traitement de la grippe humaine
1.8.1. Prévention
1.8.1.1 Mesures d’hygiène
1.8.1.2. Prophylaxie : vaccination et antiviraux
1.8.2. Traitement
1.8.2.1Traitement symptomatique
1.8.2.2 Traitement curatif
2. Méthodologie
2.1 .Cadre d’étude
2.1.1. Type d’étude
2.1.2. Période d’étude
2.1.3. Site de prélèvement
2.1.4. Population d’étude
2.1.5. Critères d’inclusion
2.1.6. Critères de non inclusion
2.1.7. Echantillonnage
2.1.8. Prélèvement
2.2. Présentation du Centre pour le Développement des Vaccins (CVD) du Mali et ses activités
2..2.1. Le laboratoire de recherche
2.2.2 Matériels et réactifs et appareillage
2.2.2.1 Matériels
2.2.2.2. Réactifs
2.2.2.3. Appareillage
2.3. Identification du virus influenza
2.3.1 Collecte et réception des échantillons
2.31.2. Partage et stockage des échantillons
2.3.1.3. Préparation, partage et stockage des réactifs
2.3.1.3.1.Les amorces et probes
2.3.1.4. Préparation, extraction et conservation des contrôles
2.3.1.4.1. Préparation de l’échantillon humain de contrôle négatif (HSC)
2.3.1.4.2 Préparation du contrôle positif (SIVC)
2.3.1.4.3. Préparation du H5VC
2.3.2. Etapes de la réaction RT-PCR proprement dite
2.3.2.1. Préparation générale
2.3.2.1.1. Préparation des équipements
2.3.2.1.2. Préparation des réactifs
2.3.2.1.3. Les précautions à prendre
2.3.2.2. Extraction de l’ARN des échantillons
2.3.2.3. Préparation du mélange mixte et de la plaque
2.3.2.4. Addition de l’Acide nucléique (ARN)
2.3.2.5. Addition des contrôles
2.3.2.6. Description de la procédure de préparation du template pour Applied Biosystem 7500 Fast DX System
2.3.2.7. Interprétation et report des résultats
3. Conclusion

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