L’impact de la supplémentation en vitamine A sur le statut et les réserves hépatiques en vitamine A

. Dosage de l’alpha-1 Acide Glycoprotéine 

Principe Le principe repose sur le fait qu’en présence d’anticorps anti-alpha-1 glycoprotéine acide humaine, l’AGP aussi appelée orosomucoïde présente dans l’échantillon précipite. La dispersion de lumière générée par les complexes antigène-anticorps est proportionnelle à la concentration en alpha-1 acide glycoprotéine et est quantifiée par turbidimétrie. b) Appareillage et réactifs L’AGP est dosé par un Tampon Tris (50 mmol/L, pH 8,5) (Réf 31928, BioSystèms S.A, Barcelona, Spain) contenant des anticorps de chèvre anti-AGP humains avec le même 14 automate BioSystems A15. Un standard (1×1 mL ; Réf 31195, BioSystems S.A, Barcelona, Spain) est utilisé pour la courbe de calibration. c) Mode opératoire Cent microlitres (100 µL) de l’échantillon (ou de sérum de contrôle ou de standard) sont introduits dans les cupules correspondantes et le réactif AGP disposé sur le plateau des réactifs. Le mélange réactionnel est effectué avec 3 µl de sérum et 300 µl de réactif AGP qui sont introduits dans les cuvettes du rotor. Les signaux lumineux générés par les complexes antigènes anticorps, lors de la lecture à 340 nm, sont proportionnels à la concentration en AGP présente dans l’échantillon. L’absorbance obtenue est soustraite de l’absorbance du blanc (solution saline à 0,9%) pour donner l’absorbance réelle de l’échantillon. Par interpolation avec la courbe de calibration, la concentration en AGP de l’échantillon est calculée selon la loi de Beer Lambert. 7.3.4.3. Contrôle de qualité La précision et la validité des mesures sont contrôlées grâce aux sérums Contrôle Rhumatoïde niveaux I (3×1 mL, Réf. 31213, BioSystems) et II (3×1 mL, Réf. 31214, BioSystems) pour la CRP et avec des sérums de contrôle de protéines niveaux I (3×1 mL, Réf.31211 BioSystems S.A, Barcelona, Spain) et II (3×1 mL Réf.31212 BioSystems S.A, Barcelona, Spain) pour l’AGP. Les mesures sont validées lorsque les valeurs des différents contrôles sont dans les limites admises (±3 écarts type).

Définition de l’inflammation

L’inflammation est caractérisée par des concentrations sériques en CRP et AGP respectivement supérieures à 5 mg/L et 1 g/L. L’inflammation aiguë est définie par des concentrations sériques en CRP ˃ 5 mg/L et d’AGP ≤ 1 g/L, l’inflammation chronique par des concentrations sériques en AGP ˃ 1 g/L et de CRP ≤ 5 mg/L et l’inflammation mixte par des concentrations sériques en CRP ˃ 5 mg/L et d’AGP ˃1 g/L (Thurnham et al., 2003). 8. Saisie, traitement et analyse des données La saisie, le traitement et l’analyse des données sont effectués à l’aide des logiciels Epi-info version 7.2.3.1 et 3.5.1 (Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, USA), Excel 2016 (Microsoft Corporation, Redmond, USA) et STATA/SE version 12.1 (STATA Corporation, Texas, USA). Dans un premier temps, nous avons utilisé les statistiques descriptives pour étudier les caractéristiques des sujets de l’étude. Les résultats sont exprimés 15 en moyenne ± écart type et en pourcentage. Aux fins des analyses bivariées, la CRP a subi une transformation logarithmique. Le test t de Student et l’analyse de variance (ANOVA) sont utilisés pour la comparaison des moyennes des variables suivants une distribution normale tandis que le test de Wilcoxon-Mann-Whitney est utilisé pour les variables dont la distribution n’est pas symétrique. Le test du chi2 de Pearson ou le test exact de Fisher est utilisé pour la comparaison des proportions. Pour étudier la relation entre le RS, le rapport DR/R et les marqueurs de l’inflammation nous avons utilisé le coefficient de corrélation de Pearson. Une régression linéaire simple a permis d’ajuster le rapport DR/R et la concentration en RS par les potentiels confondants. L’ajustement du RS par les marqueurs de l’inflammation est fait selon l’approche de régression développée par le projet BRINDA (Biomarkers Reflecting Inflammation and Nutritional Determinants of Anemia) (Namaste et al., 2017). Le rétinol ajusté est calculé à l’aide de la formule ci-dessous : Rétinol ajusté = Rétinol non ajusté – β1 (CRP observé – CRP réf) – β2 (AGP observé – AGP réf). Une régression linéaire permet de calculer les coefficients de régression β1 pour la CRP et β2 pour l’AGP. Les valeurs de référence (CRP réf et AGP réf) correspondent au dixième centile de la CRP (0,3 mg/L) ou de l’AGP (0,72 g/L) tandis que les valeurs observées sont les valeurs individuelles de CRP et AGP des sujets (CRP observé et AGP observé) (Namaste et al., 2017 ; Larson et al., 2018). Rétinol, CRP réf, AGP réf, de même que CRP observé et AGP observé sont à l’échelle logarithmique népérien (Ln). L’ajustement est seulement appliqué aux individus ayant une concentration sérique de CRP ˃ CRP réf, une concentration sérique de AGP ˃ AGP réf ou les deux. Une régression logistique des variables significatives dans l’analyse bivariée a permis d’identifier les facteurs associés aux réserves hépatiques en vitamine A des sujets. Pour toutes ces analyses statistiques, un seuil de signification de 5% est retenu.