Evaluation de critères de revue microscopique
du frottis sanguin

GENERALITES 

L’hémogramme ou numération-formule sanguine (NFS) fait partie des examens de biologie médicale les plus fréquemment prescrits et réalisés dans les laboratoires d’analyses de biologie médicale. Il constitue l’examen de base en hématologie cellulaire. Depuis plusieurs années, il est automatisé non seulement pour la numération des éléments figurés du sang (hématies, leucocytes et plaquettes), pour la détermination des paramètres érythrocytaires, mais également pour l’identification des populations leucocytaires normales. Toutefois, le résultat généré par ces automates peut être erroné en raison d’anomalies analytiques liées aux méthodes de dosage mises en œuvre, de cellules normales et/ou pathologiques mal identifiées par l’automate. Cette situation impose généralement l’observation d’un frottis sanguin au microscope [17]. La revue microscopique du frottis sanguin devient de ce fait une étape primordiale dans le processus de validation et plus encore dans la démarche clinique . Dans cette partie, nous traiterons d’abord de l’hémogramme automatisé et de ses limites, puis de l’examen du frottis sanguin et enfin des caractéristiques d’un test diagnostique. 

L’HEMOGRAMME OU NFS 

Réaliser un hémogramme consiste à analyser les caractéristiques des cellules circulantes du sang périphérique puis à les quantifier. Pour y parvenir, différentes méthodes d’analyse physique des cellules sont utilisées par les AHC, seules ou associées à des techniques cytochimiques ou à des marqueurs fluorescents (Figure 1). 

 Principes de l’analyse et de la numération des cellules sanguines 

 Analyse de la lignée rouge

 Les automates d’hématologie cellulaire (AHC) déterminent les paramètres érythrocytaires (nombre de globules rouges (GR), taux d’hémoglobine (Hb), hématocrite (Ht), volume globulaire moyen (VGM), teneur corpusculaire en Hb (TCMH), concentration corpusculaire moyenne en Hb (CCMH), Indice de distribution du volume des hématies (IDR)) suivant plusieurs méthodes [19]. La concentration en Hb du sang est déterminée soit par mesure spectrophotométrique (méthode de référence), soit par une technique de diffraction optique. Le nombre de globules rouges (GR) est déterminé soit par la technique par impédance, soit par les techniques de diffraction optique à au moins deux angles permettant, par la même occasion, de déterminer le taux d’Hb, le volume globulaire moyen (VGM) et la concentration en Hb au sein de chaque GR (CCMH). L’Ht est soit calculé à partir du produit du nombre des GR par le VGM, soit mesuré à partir de la somme des volumes individuels des GR qui traversent l’orifice en un temps donné (ce qui correspond à un volume précis). La TCMH et la CCMH sont généralement calculée à partir de paramètres mesurés (Hb, GR, VGM ou Ht) 

  Analyse des plaquettes 

Les plaquettes (PLT) sont dénombrées soit par mesure d’impédance, soit par diffraction laser parfois complétée par une mesure de fluorescence. Par mesure d’impédance, elles sont souvent décomptées sur la même dilution que les hématies mais dans des canaux correspondant à de plus faibles volumes. Ces différentes méthodes ont permis de proposer un certain nombre de paramètres dont le volume moyen plaquettaire (VPM) qui apparaît inversement corrélé au nombre des plaquettes et à l’origine des thrombopénies 

  Analyse des leucocytes ou globules blancs 

L’analyse des leucocytes ou des globules blancs (GB) comprend d’une part la numération des leucocytes et d’autre part l’établissement de la formule leucocytaire. La numération des GB est effectuée sur plusieurs milliers d’éléments par mesure d’impédance ou par diffraction laser après mise en contact d’un aliquote de sang avec un diluant qui lyse les hématies. Elle peut être effectuée après une lyse forte qui détruit les GR et les membranes leucocytaires tout en respectant les noyaux leucocytaires, à l’exception des granulocytes basophiles qui restent intacts. Ce canal de numération est appelé « canal basophiles ». Elle peut également s’effectuer avec des réactifs qui lysent les GR et contractent les leucocytes (déshydratation partielle), permettant d’obtenir le nombre de leucocytes ainsi qu’une formule leucocytaire approchée à trois paramètres appelée LMG (pourcentages de lymphocytes, monocytes et granulocytes). Globalement, il s’agit d’un décompte des « éléments nucléés » qui peut donc inclure des érythroblastes s’ils sont présents. Chaque particule de taille supérieure à celle d’une PLT (20 – 40 fl) et qui n’est pas détruite par les agents hémolysants est identifiée a priori comme un leucocyte et énumérée comme telle par les AHC. Pour obtenir une formule leucocytaire automatisée à cinq paramètres, les leucocytes sont analysés sur un autre canal selon diverses technologies. Dans ce cas de figure, un (ou plusieurs) histogramme bi- ou multiparamétrique (souvent la taille et un ou plusieurs autres critères) visualise les cinq populations leucocytaires sous forme de nuages de points.