Synthèse des dérivés de xanthone et étude de leurs effet inhibiteur 

Voie de Synthèse de quelques dérivés de xanthones sulfamide sélectionnés à partir du criblage : Pour tenter d’apporter une confirmation des résultats du screening virtuel par une approche de docking moléculaire menée sur notre chimiothéque de 189 dérivés de xanthone, la synthèse de quelques dérivés de xanthone sulfonamides élues de ce criblage a été mise au point afin de pourvoir tester l’inhibition de ces dérivés vis-à-vis de l’α-glucosidase. La synthèse a été effectuée selon la séquence réactionnelle (schéma 1) décrite précédemment par Hu et al1 ., légèrement modifiée. OH OCH3 H3CO H3CO O OCH3 OCH3 3 O O H3CO H3CO OCH3 OCH3 4 Cyclisation H3CO H3CO OCH3 COCl OCH3 H3CO OCH3 + 1 2 Acylation de Friedel-craft Chlorosulfonation O O H3CO H3CO OCH3 OCH3 O S O 5 Cl Insertion d’amines appropiées O O H3CO H3CO OCH3 OCH3 O S O R= NHR’ ou NR’R » R 6-10 Schéma

Schéma de synthèse des dérivés de xanthones sulfamides

Dans un premier temps, nous synthétiserons le xanthone précurseur 1,3,6,7- tetramethoxyxanthone (4) en deux étapes (schéma 2). Dans la première étape, une acylation classique de Friedel-Crafts de la 1,3,5-trimethoxybenzene (1) est mise en jeu en présence de chlorure de 2,4,5-Trimethoxybenzoyle (2) pour former la benzophénone avec un hydroxyle libre (3) avec un rendement de 68%2 . Puis, une réaction de cyclisation est effectuée par le Chapitre II. Synthèse des dérivés de xanthone et étude de leurs effet inhibiteur 111 traitement de benzophénone (3) avec une solution 25% d’ hydroxyle de tétrabutyl ammonium dans de la pyridine et de l’eau, menant ainsi au xanthone souhaité (3) avec un bon rendement (90%)3 . 1 H3CO H3CO COOCl OCH3 OCH3 H3CO OCH3 AlCl3 , Et2O, rt, 48h 2 OH OCH3 H3CO H3CO O OCH3 OCH3 3 TBAOH (25%in H2O) Pyridine-H2O (1:1) reflux, 4h O O H3CO H3CO OCH3 OCH3 4 Schéma II. 2. Voie de synthèse du précurseur 1,3,6,7-tetramethoxyxanthone (4) Une fois le précurseur (4) obtenu, sa chlrosulfonation est mise en œuvre en présence d’acide chlorosulfonique à 0°C pour donner le composé (5) avec un rendement de 81%. Le traitement de cet intermédiaire clé avec l’amine appropriée dans le 1,4-dioxane permet l’accès aux xanthones sulfamide (6-10)4 . Chapitre II. Synthèse des dérivés de xanthone et étude de leurs effet inhibiteur 112 O O H3CO H3CO OCH3 OCH3 O S O R 6-10 O O H3CO H3CO OCH3 OCH3 O S O Cl O O H3CO H3CO OCH3 OCH3 4 5 HSO3Cl rt, 1h amine, 1,4-dioxane 0°C, 30 min Schéma II. 3. Voie d’accès aux dérives de xanthone sulfamide à partir du précurseur (4) Tableau II. 1.. structure des tetramethoxy-xanthones sulfamides synthétisés composé Encodé dans la chimiothéque R Rdt (%) 6 X109 Cl NH 59.7% 7 X107 F NH 62% 8 X102 N COOEt 53% 9 X117 HN 46% 10 X108 NH 54.7% Chapitre II. Synthèse des dérivés de xanthone et étude de leurs effet inhibiteur 113 2. Evaluation de l’activité inhibitrice : En raison de la non-disponibilité de l’enzyme choisie comme cible MGAM, nous avons orienté notre évaluation biologique vers un test in-vitro sur l’α-glucosidase (EC 3.2.1.20) à partir de levure Saccharomyces cerevisiae5 . Le ρ-nitrophényl glucopyranoside (ρNP-glucose) a été utilisé comme substrat qui s’hydrolyse en présence de l’α-glucosidase pour produire le glucose et le ρ-nitrophénol. En milieu basique, la formation du ρnitrophénolate manifeste une coloration jaune mesurée par absorbance à λ=405 nm avec Spectrophotomètre UV-visible. Le taux de libération de ρ-nitrophénolate permet, ainsi de mesurer l’activité inhibitrice. Plus la quantité de ρ-nitrophénolate sera élevée, moins l’inhibiteur sera actif. L’acarbose a été utilisé comme un inhibiteur de référence. Schéma II. 4: Réaction enzymatique en présence du ρ-nitrophényl glucopyranoside comme substrat. Chaque test est effectué trois fois (triplicatas) en diluant les composés à différentes concentrations dans du DMSO. Les pourcentages d’inhibition sont calculés selon l’équation suivante : Avec: – : absorbance en absence de l’inhibiteur (appelée test control) Chapitre II. Synthèse des dérivés de xanthone et étude de leurs effet inhibiteur 114 – : absorbance en présence de l’inhibiteur en interaction avec l’enzyme en prenant en considération l’absorbance de l’inhibiteur seul (Ablanc) pour éviter toute interférence. Puis, l’IC50 (concentration nécessaire pour inhiber 50% de l’activité de la protéine) de chaque produit s’obtient en corrélant le pourcentage d’inhibition et les différentes concentrations du produit nécessaires pour obtenir cette inhibition. Une régression nonlinéaire obtenue après traitement statistique donne accès à cette valeur caractéristique de chaque composé (tableau 2).